構(gòu)建植物表達(dá)載體1：在 “一種植物葉片高表達(dá)雙向啟動子及其應(yīng)用" 的研究中，科研人員取 10μg 人工直接合成的 promoter at1g52220/30 片段與 1μg 的 pcambia1300 - egfp - mcherry 空載體質(zhì)粒，分別用 BamHI（NEB，#R3136S）及 KpnI（NEB，#R3142S）雙酶切，37℃酶切 3 小時(shí)。割膠回收酶切反應(yīng)產(chǎn)物，用 T4 DNA 連接酶連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5α 感受態(tài)細(xì)胞，最終獲得了 pcambia1300 - egfp - mcherry - promoter at1g52220/30 載體，用于后續(xù)在煙草葉片中的瞬時(shí)表達(dá)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了雙向啟動子的有效性。

構(gòu)建融合蛋白表達(dá)載體3：在 “一種 DNA 環(huán)化分子及其用途的制作方法" 的研究中，以 LDB1 的 cDNA 作為 PCR 模板，設(shè)計(jì)帶有 KpnI - HF 酶切位點(diǎn)的引物，擴(kuò)增 LDB1 的 dimmer domain（DD）片段。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后，與 pST1374 - N - NLS - Flag - Linker - dCas9 載體用 NotI - HF（NEB，R3189S）和 KpnI - HF（NEB，R3142S）做酶切，37℃孵育 2h。酶切產(chǎn)物經(jīng)割膠回收后，通過 T4 連接酶連接，轉(zhuǎn)化涂板，經(jīng) Sanger 測序得到正確的 DD - dCas9 質(zhì)粒，用于后續(xù)研究融合蛋白 LDB1 - dCas9 對基因表達(dá)的調(diào)控作用。