Gilson GPC/SEC色譜柱與標(biāo)準(zhǔn)品在生物大分子表征中的應(yīng)用進(jìn)展

內(nèi)容簡介：
本文系統(tǒng)介紹了Gilson在凝膠滲透色譜/尺寸排阻色譜（GPC/SEC）領(lǐng)域的產(chǎn)品，包括其適用于蛋白質(zhì)、單克隆抗體、聚集體、多糖和合成聚合物分析的系列色譜柱及校正用標(biāo)準(zhǔn)品。文章闡述了GPC/SEC基于流體動(dòng)力學(xué)體積進(jìn)行分離的原理，及其在測定生物大分子分子量分布、聚合度、聚集態(tài)方面的優(yōu)勢。重點(diǎn)分析了色譜柱填料的孔徑選擇、柱效、以及溶劑體系（對(duì)于傳統(tǒng)GPC）和流動(dòng)相條件（對(duì)于生物SEC）對(duì)分離效果的影響。詳細(xì)討論了絕對(duì)分子量與相對(duì)分子量的測定方法，以及標(biāo)準(zhǔn)品在系統(tǒng)校正和數(shù)據(jù)解讀中的核心作用。通過蛋白質(zhì)藥物聚集體分析、聚合物質(zhì)量控制等案例，展示了該技術(shù)如何保障生物制藥和材料研發(fā)的產(chǎn)品質(zhì)量。

關(guān)鍵詞： 尺寸排阻色譜、分子量分布、生物大分子表征、蛋白質(zhì)聚集體、系統(tǒng)校正

正文

在生物制藥和高分子材料領(lǐng)域，分子的尺寸大?。黧w動(dòng)力學(xué)體積）及其分布（Dispersity, ?）是決定產(chǎn)品性質(zhì)、功能、穩(wěn)定性和安全性的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）。凝膠滲透色譜（GPC），在生物領(lǐng)域常稱為尺寸排阻色譜（Size-Exclusion Chromatography, SEC），是表征這些參數(shù)的經(jīng)典且技術(shù)。Gilson為該領(lǐng)域提供了經(jīng)過精心優(yōu)化和嚴(yán)格質(zhì)量控制的SEC色譜柱、標(biāo)準(zhǔn)品和兼容的純化系統(tǒng)，為科研和工業(yè)界的質(zhì)控與研發(fā)提供了可靠的工具。

SEC的分離機(jī)理不同于其他HPLC模式，它基于分子在多孔填料中的空間排阻效應(yīng)（Steric Exclusion）。較大的分子無法進(jìn)入填料孔隙，較早被洗脫；較小的分子可進(jìn)入更多孔隙，路徑更長，較晚被洗脫。因此，洗脫順序嚴(yán)格遵循從大到小的順序。對(duì)于生物大分子，如蛋白質(zhì)、抗體、疫苗和核酸，SEC主要用于分析其聚集體（Aggregates）、片段（Fragments）和單體（Monomer）的含量，這對(duì)于保證生物藥物的效力和降低免疫原性風(fēng)險(xiǎn)至關(guān)重要。

色譜柱是SEC的核心。Gilson提供的SEC色譜柱，其填料通常是由親水改性的硅膠或高交聯(lián)度的聚合物微球制成，具有一系列精確控制的孔徑尺寸。選擇合適孔徑范圍的色譜柱是成功分離的前提。填料的表面惰性處理至關(guān)重要，必須最大限度地減少與分析物（尤其是蛋白質(zhì)）的非特異性吸附，以防止峰拖尾、回收率低和結(jié)果失真。Gilson的SEC柱以其低吸附性和高柱效而著稱，能夠清晰地分辨出單抗樣品中含量僅為百分之零點(diǎn)幾的二聚體甚至更高級(jí)的聚集體。

為了從洗脫體積計(jì)算出準(zhǔn)確的分子量，必須使用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正。Gilson提供多種窄分布和寬分布的分子量標(biāo)準(zhǔn)品，包括蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（用于生物SEC）和聚苯乙烯（PS）、聚乙二醇（PEG）標(biāo)準(zhǔn)（用于傳統(tǒng)GPC）。建立標(biāo)準(zhǔn)品的校正曲線（Log Mw vs. Retention Time）后，即可根據(jù)樣品的保留時(shí)間推算其分子量（相對(duì)分子量）。對(duì)于更精確的絕對(duì)分子量測定，則需要與多角度激光光散射（MALS）檢測器聯(lián)用，此時(shí)SEC柱的作用是為MALS提供分離后的單一樣品流。

在生物藥開發(fā)中，SEC-HPLC是監(jiān)測產(chǎn)品在整個(gè)生產(chǎn)工藝和儲(chǔ)存期間聚集情況的金標(biāo)準(zhǔn)方法，是放行檢驗(yàn)（Release Testing）的必檢項(xiàng)目。在高分子化學(xué)中，GPC是測定聚合物平均分子量（Mn, Mw）和分子量分布（MWD）的核心手段，直接影響材料的力學(xué)性能、流變學(xué)和加工性能。Gilson的解決方案不僅局限于分析，其制備級(jí)SEC系統(tǒng)還可用于大規(guī)模脫鹽、緩沖液置換和從聚集體中純化活性單體。

在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物提供試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實(shí)驗(yàn)缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點(diǎn)。易匯生物的產(chǎn)品運(yùn)營團(tuán)隊(duì)表示，其現(xiàn)貨試劑可實(shí)現(xiàn)當(dāng)日下單、次日送達(dá)，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實(shí)驗(yàn)進(jìn)度穩(wěn)定推進(jìn)。 SEC色譜柱和分子量標(biāo)準(zhǔn)品是核心消耗品。色譜柱有使用壽命，標(biāo)準(zhǔn)品需要定期更新以保證校正準(zhǔn)確性。穩(wěn)定及時(shí)的供應(yīng)確保了質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室的分析方法能夠持續(xù)合規(guī)運(yùn)行，研發(fā)項(xiàng)目中的分子量表征工作不會(huì)因耗材問題而中斷，保障了產(chǎn)品研發(fā)和質(zhì)量監(jiān)控的連續(xù)性。

綜上所述，Gilson的GPC/SEC解決方案通過提供高性能的色譜柱、準(zhǔn)確可靠的標(biāo)準(zhǔn)品和靈活的系統(tǒng)配置，為用戶提供了從分析到制備、從相對(duì)分子量到絕對(duì)分子量的全面表征能力。它是連接分子結(jié)構(gòu)與其宏觀性能之間的重要橋梁，是生物制藥和高分子材料研發(fā)與質(zhì)量控制中技術(shù)支柱。